SealSAFE è il primo sistema automatico al mondo per il riempimento automatico di fissativo (es. formalina) e/o sigillatura sottovuoto di campioni biologici in speciali buste portacampione.
Questa tecnologia innovativa e brevettata consente agli operatori nelle sale operatorie e nei laboratori di patologia di gestire i campioni di istologia in totale sicurezza.
Le biopsie sono di piccole dimensioni e vengono fissate rapidamente quando poste in formalina tamponata neutra (4% formaldeide), ma i campioni chirurgici più grandi richiedono condizioni e fissazione controllate. Tuttavia, gli amministratori di laboratorio devono prestare particolare attenzione a limitare l’esposizione del personale alla formaldeide, che è un reagente pericoloso. Per ottenere i migliori risultati, è ottimale che il processo di fissazione sia controllato dal laboratorio di patologia, pertanto SealSAFE può essere utilizzato anche per il trasporto e la conservazione dei campioni senza fissativo. Ciò può comportare la raccolta e il trasporto di campioni freschi nel laboratorio di patologia, mantenuti sottovuoto e refrigerati, per preservare una morfologia ottimale e la perfetta conservazione delle macro molecole.
Campioni biologici freschi possono essere prelevati in sala operatoria e trasportati in laboratorio per la valutazione del patologo, l’analisi molecolare o la banca dei tessuti, secondo gli appositi protocolli definiti.
Molti Istituti hanno dimostrato l’effetto dannoso sugli acidi nucleici e sulle proteine dal tempo di ischemia fredda. L’ischemia fredda si verifica tra la rimozione del tessuto e la sua fissazione ed è un problema per i grandi campioni chirurgici. L’ischemia fredda altera i livelli di espressione genica (a livello di RNA e proteine) ed è un importante fattore per la patologia molecolare. Si raccomanda quindi il controllo del trasporto e della conservazione dei campioni per l’analisi molecolare di proteine come ERBB2 (HER2) o per l’analisi dell’espressione genica. Il confezionamento sottovuoto del tessuto e il trasferimento al laboratorio a 4°C (TissueSAFE – SealSAFE) possono essere molto utili per siti distanti dal laboratorio di Anatomia Patologica.
Il raffreddamento dovrebbe essere il più rapido possibile e la fissazione a freddo preserva bene l’RNA.
Questa innovativa tecnologia di trasporto e conservazione dei campioni, consente agli operatori nelle sale operatorie e nei laboratori di patologia di gestire i campioni di istologia in totale sicurezza. Le operazioni manuali odierne per la preparazione, il trasporto e lo stoccaggio di campioni di istologia possono essere drasticamente migliorate con la tecnologia SealSAFE.
Le procedure tradizionali di raccolta, trasporto e archiviazione dei campioni di patologia sono al momento specifiche e spesso differenti per ciascun Istituto. L’introduzione della tecnologia SealSAFE al punto di partenza della generazione del campione (la sala operatoria), all’accettazione in Anatomia Patologica e nell’area di dissezione fornisce una soluzione dinamica e flessibile con vantaggi per tutti i reparti coinvolti.
Tale procedura consente un attento monitoraggio dei tempi di fissazione e permette di ottenere tessuti freschi (non fissati) per la biobanca, le colture cellulare e gli xenotrapianti, preservando al contempo gli acidi nucleici e le proteine.
Nella stanza adiacente al reparto di chirurgia, SealSAFE viene utilizzato per sigillare sotto vuoto i campioni biologici per essere trasportati in laboratorio. L’operatore può selezionare la procedura desiderata per la gestione dei campioni: sigillatura sottovuoto priva di fissativo, senza medium di trasporto e con trasporto immediato in laboratorio oppure con riempimento automatico di fissativo più sigillatura sottovuoto, con campioni conservati anche a temperatura ambiente.
Si consiglia di tagliare i campioni di grandi dimensioni per consentire una migliore penetrazione del fissativo.
Le condizioni di tempo e temperatura durante il trasporto sono monitorate con un data logger elettronico dedicato, attivato dall’operatore direttamente da SealSAFE. In caso di sigillatura sottovuoto senza fissativo, è richiesto il mantenimento e lo stoccaggio a + 4°C. In questa modalità, la conservazione ottimale del materiale molecolare del campione è assicurato fino a 72 ore, coprendo anche le operazioni dal venerdì al lunedì.
L’installazione di un’unità SealSAFE nel laboratorio di patologia consente la massima flessibilità per la raccolta dei campioni. Inoltre, le buste riutilizzabili per sottovuoto SealSAFE consentono molteplici operazioni di apertura e ri-sigillatura. Questi possono comprendere un pre-esame dello stato di fissazione di campioni di grandi dimensioni, la ricezione, la dissezione e l’archivio dei campioni. I tessuti ben fissati possono essere sigillati con quantità minime di formalina o semplicemente con il vuoto, ottenendo anche l’abbattimento dei costi di smaltimento e dei volumi da archiviare. Quando i campioni arrivano in Anatomia Patologica e vengono accettati, i dati rilevanti possono essere scaricati e salvati per un futuro utilizzo. Un profilo dettagliato delle condizioni di temperatura, della durata della conservazione e le informazioni aggiuntive sul trasporto e sulla conservazione dei campioni sono visualizzabili e facilmente associabili ai casi dei pazienti.
In aggiunta, è noto che la formaldeide è tossica ed è classificata come cancerogena di categoria 1B ed è stata dimostrata una significativa associazione tra le procedure di fissazione della formalina e la generazione di DNA danneggiato ossidativamente testimoniato anche dalla formazione di addotti molecolari. Ciò giustificherebbe il suo divieto, come recentemente proposto dalle autorità dell’UE. La formaldeide può indurre livelli aumentati di stress ossidativo e aumenta la formazione di ROS in diversi modi, tra cui l’attivazione di ossidasi e l’inibizione dei sistemi di eliminazione.
Tuttavia, dato che ad oggi non è disponibile un reagente in grado di garantire le stesse prestazioni in istopatologia, una politica ragionevole è quella di ridurre il rischio durante la preparazione, il trasporto e lo stoccaggio dei campioni, creando condizioni di lavoro in cui l’esposizione del personale coinvolto è limitata a un minimo accettabile. L’adozione della procedura del sistema del vuoto per i campioni chirurgici trasportati in laboratorio comporta un netto calo dell’esposizione degli infermieri alla formaldeide. In effetti, sono state fornite prove della riduzione dello stress ossidativo negli infermieri che adottano la tecnica del vuoto, come alternativa all’uso della formaldeide nelle sale operatorie. Questi dati si aggiungono all’esperienza già acquisita sui vantaggi offerti dalla procedura del sistema del vuoto nella raccolta dei campioni, in termini di una migliore conservazione dei tessuti per la diagnosi e per la ricerca e l’apprezzamento della procedura operativa da parte del personale infermieristico. La principale fonte di esposizione alla formaldeide non è durante l’utilizzo dei flaconcini preriempiti per il fissaggio di piccole biopsie: la maggior parte dell’esposizione è correlata alla prodedura di riempimento con formalina (3-5 litri alla volta) nei contenitori per i campioni. In conclusione: con SealSAFE Milestone offre un metodo innovativo e testato con numerosissime pubblicazioni scientifiche, per un trasporto e una conservazione dei campioni ottimizzato e più sicuro.
Nel Blocco Operatorio, gli infermieri o gli assistenti dei chirurghi possono così sigillare i campioni in modo automatizzato, standardizzato e i tessuti sono quindi pronti per essere trasportati in laboratorio in buste sottovuoto con o senza medium di trasporto. Durante il trasporto dei campioni, non vi è rischio di fuoriuscita del fissativo (tipicamente formalina, se presente) e dei relativi fumi.
Una volta nel laboratorio di Patologia, i campioni vengono immediatamente accettati e sezionati per usi diversi come per il biobanking, la coltura cellulare e l’analisi di acidi nucleici e proteine. Al termine della procedura, i campioni vengono ri-sigillati e conservati in modo sicuro in buste sottovuoto, risparmiando sia spazio di conservazione che i costi di smaltimento.
Le pubblicazioni documentano anche la validazione scientifica del tessuto placentare per l’esame istopatologico utilizzando il sistema TissueSAFE con sigillatura sottovuoto a fresco, senza formalina. Lo studio è stato condotto per documentare la sicurezza, la qualità dei risultati e il risparmio di SealSAFE per il trasporto di questa tipologia di campioni. Mentre la maggior parte delle placente sono normali e non richiedono un esame patologico, necessitano comunque di un sistema sicuro per la conservazione e lo smaltimento. Le placente che richiedono una valutazione patologica presentano numerosi rischi in termini di tempo ex-vivo non standardizzato, condizioni di conservazione dei tessuti e tempo di fissazione di formalina.
Anche il consumo di alti volumi di formalina per una corretta fissazione e la quantità a volte inadeguata di formalina rappresentano delle sfide. È necessario uno smaltimento costoso del campione e del contenitore associato e della formalina come rifiuto pericoloso al termine del percorso diagnostico. Per affrontare tutti questi problemi è stato condotto uno studio per valutare un sistema di gestione sottovuoto e privo di formalina per le placente, progettato per reparti di Ostetricia con l’intento di controllare la conservazione della placenta e il trasporto in patologia per la valutazione istologica.
Progettazione dello studio: otto placente sono state sigillate sotto vuoto e trasportate fresche dalle Sale Parto al laboratorio di Patologia. Ciascuna è stato sezionata secondo i protocolli e suddivise in tre sezioni standard e al termine della conservazione son state poi fissate in formalina. Le placente sono state sigillate a basso vuoto con il sistema TISSUESAFE e conservate a 4°C per 24 ore. (8 casi) 48 ore (4 casi) e 72 ore (4 casi). Le diapositive colorate H&E sono state giudicate in modo indipendente da due patologi usando uno schema in tre livelli: 1) adeguato, 2) sub-ottimale o 3) inadeguato per la valutazione istologica.
Risultati: tutte le 102 diapositive H&E sono state valutate come adeguate per la valutazione istologica. Non è stata osservata alcuna degradazione dei dettagli istologici tra fresco, fissato in formalina e fissazione ritardata dopo 72 ore di conservazione a freddo sigillata sottovuoto.
Conclusione: la validazione istologica della placenta umana sigillata sottovuoto consente di prendere in considerazione un processo progettato diversamente per la gestione dei tessuti da parte di operatori sanitari e patologi.
I potenziali vantaggi sono la conservazione controllata e il controllo della fase preanalitica della placenta fino a tre giorni a temperatura di frigorifero. La fissazione controllata di sezioni fresche da ciascuna placenta conservata riduce notevolmente la quantità di formalina (circa un gallone per placenta) normalmente utilizzata per fissare l’intera placenta. La riduzione della quantità di formalina nella fase iniziale del processo si traduce in una riduzione del costoso smaltimento della formalina come rifiuto pericoloso. Entrambe le riduzioni si traducono in notevoli risparmi economici per il sistema sanitario. Nelle Sale Parto ciò può inoltre eliminare la formalina dal reparto e quindi l’esposizione alla formalina per il personale. Inoltre, la maggior parte delle placente richiede lo smaltimento e la sigillatura sotto vuoto di singoli campioni garantisce un isolamento e uno smaltimento sicuri, evitando la conservazione di un contenitore per lo smaltimento dei rifiuti fetido nell’unità di lavoro e consegna.
L’uso della sigillatura sottovuoto e della conservazione a freddo delle placente umane nelle Sale Parto è una tecnologia innovativa che offre tre notevoli elementi di miglioramento:
1. Sicurezza.
a. Non è richiesta la formalina in Sala Parto per trasportare le placente al laboratorio
b. Sigillatura sicura delle placente rimanenti in buste sigillate per lo smaltimento dei rifiuti o la restituzione al paziente (se richiesta)
2. Qualità.
a. Controllo delle variabili pre-analitiche dei campioni
b. Tempi di fissazione della formalina controllati in laboratorio
3. Costo.
Evitare il costoso smaltimento della formalina come rifiuto pericolosoAltre pubblicazioni citano la corretta conservazione degli acidi nucleici dei campioni chirurgici sigillati sottovuoto. Lo studio è stato sviluppato per comprendere l’impatto del trasporto di campioni utilizzando campioni sigillati sottovuoto e refrigerati.
La formalina è un fissativo universale in patologia, tuttavia è altamente tossica e cancerogena, classe 1B. L’uso richiede particolari accorgimenti per proteggere il personale da un’esposizione non necessaria.
Gli sforzi per l’eliminazione della formalina dal blocco operatorio hanno anche l’obiettivo di poter permettere le corrette analisi e una migliore accuratezza diagnostica. Lo studio citato è stato sviluppato per dimostrare questo particolare aspetto.
Progetto: 15 campioni biologici di colon, polmone e utero sono stati selezionati per lo studio. I campioni sono stati sigillati in una busta di plastica sotto vuoto e trasportati a 4°C. Questi sono stati confrontati con campioni che sono stati raccolti e congelati a -80°C e con campioni FFPE (fissati in formalina e inclusi in paraffina).
Risultati: le sezioni colorate H&E di tutti i campioni hanno mostrato una conservazione istologica ottimale. La resa del DNA estratto e dell’RNA era adeguata con buona purezza sia per i tessuti freschi che per i tessuti FFPE.
Conclusioni: le sezioni colorate H&E tutti i campioni non hanno mostrato artefatti morfologici significativi con conservazione istologica ottimale.I dati suggeriscono che l’integrità del DNA è molto ben conservata anche dopo 3 ore di sigillatura sottovuoto dei campioni chirurgici senza fissazione di formalina. L’integrità dell’RNA era marginale nell’FFPE con il ritardo nella fissazione, mentre non vi era alcun declino significativo nel gruppo di campioni sigillati sottovuoto a fresco. La conservazione sottovuoto di campioni chirurgici è un’opzione praticabile, rispettosa delle molecole e sicura per l’ambiente per il trasporto di tessuti in laboratorio.
I numerosi studi sperimentali e clinici sull’esposizione alla formaldeide hanno convinto le organizzazioni governative e le strutture istituzionali a implementare misure per monitorare l’esposizione alla formaldeide.
Mentre ci sono chiare indicazioni a limitare o addirittura eliminare l’uso della formaldeide, il valore della formaldeide come fissativo universale nella patologia anatomica suggerisce che continuerà ad essere in uso per l’immediato futuro. Il valore di SealSAFE e TissueSAFE sia per il personale di Istologia che per quello Chirurgico è una soluzione efficace e immediata per affrontare e ridurre l’esposizione alla formalina.
Le fuoriuscite di formalina che possono verificarsi durante il trasporto di campioni in contenitori di plastica che perdono o si rompono, comporteranno un aumento della superficie della formalina. L’evaporazione del gas formalina dipende più dalla superficie che dal volume stesso della formalina versata. Ciò significa che una piccola fuoriuscita può comportare un’esposizione più elevata di quella che si verifica normalmente durante la normale manipolazione. Livelli di esposizione che superano il limite di esposizione a breve termine (STEL) di 2 ppm per un’esposizione di 15 minuti possono facilmente verificarsi anche con volumi relativamente ridotti e che richiedono pulizia da parte di personale addestrato ed evacuazione di pazienti e del personale durante la pulizia.